Javascript учурда браузериңизде өчүрүлгөн.Javascript өчүрүлгөндө, бул веб-сайттын кээ бир функциялары иштебейт.
Хавьер Фидалго, * Пьер-Антуан Деглесне, * Родриго Арройо, * Лилиан Сепульведа, * Евгения Раннева, Филипп Депрез илим бөлүмү, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Каталония, Испания * Бул авторлор бул эмгек боюнча бир аз түшүнүккө ээ. салым фон: Гиалурон кислотасы (HA) эстетикалык максаттар үчүн тери толтургучтарды өндүрүүдө колдонулган табигый полисахарид болуп саналат.Адамдын кыртыштарында жарым-жартылай ажыроо мезгили бир нече күн болгондуктан, HA негизиндеги тери толтургучтары денедеги өмүрүн узартуу үчүн химиялык жактан өзгөртүлгөн.Коммерциялык HA негизиндеги толтургучтардагы эң кеңири таралган модификация HA чынжырларын кайчылаш байланыштыруучу агент катары 1,4-бутандиол диглицидил эфирин (BDDE) колдонуу болуп саналат.Калдык же реакцияга кирбеген BDDE <2 миллиондо бөлүктө (ppm) уулуу эмес деп эсептелет;ошондуктан, акыркы тери толтургучтагы калдык BDDE пациенттин коопсуздугун камсыз кылуу үчүн сандык эсептелиши керек.Материалдар жана методдор: Бул изилдөө суюк хроматографияны жана масс-спектрометрияны (LC-MS) айкалыштыруу аркылуу щелочтук шарттарда BDDE жана HA ортосундагы кайчылаш реакциянын кошумча продуктусун аныктоону жана мүнөздөөнү сүрөттөйт.Натыйжалар: Ар кандай анализдерден кийин HA-BDDE гидрогелин дезинфекциялоо үчүн колдонулган щелочтук шарттар жана жогорку температура бул жаңы кошумча продукт, "пропиленгликол сыяктуу" кошулма пайда болушуна өбөлгө түзөрү аныкталган.LC-MS анализи кошумча продукт BDDE сыяктуу эле моноизотоптук массага, башка кармоо убактысы (tR) жана башка UV жутуу (λ=200 нм) режимине ээ экенин тастыктады.BDDEден айырмаланып, LC-MS анализинде ошол эле өлчөө шарттарында бул кошумча продукт 200 нмде жогорураак аныктоо ылдамдыгына ээ экендиги байкалган.Жыйынтык: Бул жыйынтыктар бул жаңы кошулма түзүмүндө эч кандай эпоксид бар экенин көрсөтүп турат.Талкуу коммерциялык максатта HA-BDDE гидрогели (HA тери толтургуч) өндүрүшүндө табылган бул жаңы кошумча продуктунун тобокелдигин баалоо үчүн ачык.Негизги сөздөр: гиалурон кислотасы, HA тери толтургуч, кайчылаш гиалурон кислотасы, BDDE, LC-MS анализи, BDDE кошумча продуктусу.
Гиалурон кислотасынын (HA) негизиндеги толтургучтар косметикалык максаттарда колдонулган эң кеңири таралган жана популярдуу тери толтургучтары болуп саналат.1 Бул тери толтургуч гидрогель, адатта >95% суудан жана 0,5-3% ГАдан турат, бул аларга гел сымал түзүлүштү берет.2 ГА полисахарид жана омурткалуулардын клеткадан тышкаркы матрицасынын негизги компоненти.ингредиенттердин бири.Ал гликозиддик байланыштар менен байланышкан (1,4)-глюкурон кислотасы-β (1,3)-N-ацетилглюкозамин (GlcNAc) кайталануучу дисахариддик бирдиктерден турат.Бул дисахарид үлгүсү бардык организмдерде бирдей.Кээ бир протеинге негизделген толтургучтарга (мисалы, коллаген) салыштырганда, бул касиет HA-ны өтө био шайкеш молекула кылат.Бул толтургучтар пациенттин иммундук системасы тарабынан таанылышы мүмкүн болгон аминокислота ырааттуулугунун өзгөчөлүгүн көрсөтө алат.
Тери толтургуч катары колдонулганда, ГАнын негизги чектөөсү гиалуронидазалар деп аталган ферменттердин белгилүү бир үй-бүлөсүнөн улам ткандардын ичинде тез айлануусу болуп саналат.Буга чейин, HA структурасында бир нече химиялык өзгөртүүлөр кыртыштарда HA жарым ажыроо мөөнөтүн жогорулатуу үчүн сүрөттөлгөн.3 Бул модификациялардын көбү гиалуронидазанын полисахариддик полимерлерге кирүү мүмкүнчүлүгүн HA чынжырларын кайчылаш байланыштырууга аракет кылышат.Демек, HA түзүмү менен кайчылаш агенттин ортосундагы көпүрөлөрдүн жана молекулалар аралык коваленттик байланыштардын пайда болушунан улам кайчылаш байланышкан HA гидрогели табигый HAга караганда ферменттердин бузулушуна каршы продукцияны көбүрөөк чыгарат.4-6
Буга чейин кайчылаш HA өндүрүү үчүн колдонулган химиялык кайчылаш агенттерге метакриламид, 7 гидразид, 8 карбодиимид, 9 дивинилсульфон, 1,4-бутандиол диглицидил эфири (BDDE) жана поли(этиленгликол) диглицидил эфири кирет.10 ,11 BDDE учурда эң көп колдонулган кайчылаш байланыш агенти болуп саналат.Гидрогелдердин бул түрлөрү ондогон жылдар бою коопсуз экендиги далилденсе да, колдонулган кайчылаш агенттер реактивдүү реагенттер болуп саналат, алар цитотоксик жана кээ бир учурларда мутагендик болушу мүмкүн.12 Ошондуктан акыркы гидрогелдеги алардын калдыктары жогору болушу керек.BDDE калдык концентрациясы миллиондо 2 бөлүктөн (ppm) аз болгондо коопсуз деп эсептелет.4
Төмөн калдыктуу BDDE концентрациясын, кайчылаш байланыш даражасын жана HA гидрогелдериндеги алмаштыруу абалын аныктоонун бир нече ыкмалары бар, мисалы, газ хроматографиясы, масс-спектрометрия (MS) менен бирге чоңдуктарды алып салуу хроматографиясы, ядролук магниттик-резонанстык (ЯМР) флуоресценцияны өлчөө ыкмалары жана Диод массивинин кошулган жогорку натыйжалуу суюк хроматографиясы (HPLC).13-17 Бул изилдөө щелочтук шарттарда BDDE жана HA реакциясынын натыйжасында өндүрүлгөн акыркы кайчылаш байланышкан HA гидрогельдеги кошумча продуктунун табылышын жана мүнөздөлүшүн сүрөттөйт.HPLC жана суюк хроматография-масс-спектрометрия (LC-MS анализи).BDDE бул кошумча продуктунун уулуулугу белгисиз болгондуктан, биз анын калдыктарынын санын аныктоону, адатта, акыркы продуктта BDDEде аткарылган ыкмага окшош түрдө аныктоону сунуштайбыз.
Алынган HA натрий тузунун (Shiseido Co., Ltd., Токио, Япония) молекулалык салмагы ~1 368 000 Да (Лоран ыкмасы) 18 жана ички илешкектүүлүгү 2,20 м3/кг.Кайчылаш реакция үчүн BDDE (≥95%) Sigma-Oldrich Ко. (Сент-Луис, МО, АКШ) сатып алынган.рН 7,4 болгон фосфат буфердик туз Сигма-Олдрих компаниясынан сатылып алынган.LC-MS анализинде колдонулган бардык эриткичтер, ацетонитрил жана суу HPLC классынын сапатынан сатылып алынган.Реагенттин сорту катары кумурска кислотасы (98%) сатылып алынат.
Бардык эксперименттер UPLC Acquity тутумунда аткарылган (Waters, Milford, MA, USA) жана электроспрей иондоштуруу булагы (AB SCIEX, Framingham, MA, АКШ) менен жабдылган API 3000 үч төрт полюстуу масс-спектрометрге туташтырылган.
Кайчылаш байланышкан HA гидрогельдеринин синтези 1% щелочтун (натрий гидроксиди, NaOH) катышуусунда 10% (сал/ж) натрий гиалуронат (NaHA) эритмесине 198 мг BDDE кошуу менен башталган.Реакция аралашмасындагы акыркы BDDE концентрациясы 9,9 мг/мл (0,049 мМ) болгон.Андан кийин, реакция аралашмасы кылдат аралаштырылган жана гомогендештирилген жана 45 ° C 4 саат бою улантууга уруксат берилген.19 Реакциянын рНы ~12де сакталат.
Андан кийин реакция аралашмасы суу менен жуулчу жана акыркы HA-BDDE гидрогели чыпкаланган жана PBS буфери менен 10-25 мг/мл HA концентрациясына жана 7,4 акыркы рНга жетүү үчүн суюлтулган.Өндүрүлгөн кайчылаш байланышкан HA гидрогелдерин стерилизациялоо үчүн бул гидрогельдердин бардыгы автоклавдалат (120°С 20 мүнөт).Тазаланган BDDE-HA гидрогели анализге чейин 4°C температурада сакталат.
Кайчылаш байланышкан HA продуктусунда болгон BDDEди талдоо үчүн 240 мг үлгү таразага тартылып, борбордук тешикке киргизилген (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, АКШ; көлөмү 0,5 мл) жана бөлмө температурасында 10 000 айн/минутунда центрифугаланган. 10 мүнөт.Жалпысынан 20 мкл ылдый түшүүчү суюктук чогултулуп, анализденди.
BDDE стандартын (Sigma-Aldrich Co) щелочтук шарттарда (1%, 0,1% жана 0,01% NaOH) талдоо үчүн, эгерде төмөнкү шарттар аткарылса, суюк үлгү 1:10, 1:100 же чейин 1:1,000,000 Зарыл болсо, талдоо үчүн MilliQ деионизацияланган сууну колдонуңуз.
Кайчылаш байланыш реакциясында колдонулган баштапкы материалдар үчүн (HA 2%, H2O, 1% NaOH жана 0,049 мМ BDDE) ушул материалдардан даярдалган ар бир үлгүдөн 1 мл ошол эле анализ шарттарын колдонуу менен анализденди.
Ион картасында пайда болгон чокулардын өзгөчөлүгүн аныктоо үчүн 20 мкл үлгүгө 10 мкл 100 ppb BDDE стандарттуу эритмеси (Sigma-Oldrich Co) кошулду.Бул учурда ар бир үлгүдөгү стандарттын акыркы концентрациясы 37 ppb.
Биринчиден, 10 мкл стандарттык BDDE (Sigma-Aldrich Co) менен 990 мкл MilliQ суусу (тығыздыгы 1,1 г/мл) менен суюлтуу аркылуу 11,000 мг/л (11,000 промилле) концентрациясы менен BDDE запастык эритмесин даярдаңыз.Бул эритмени 110 мкг/л (110 ppb) BDDE эритмесин орто стандарттуу суюлтуу катары даярдоо үчүн колдонуңуз.Андан кийин, 75, 50, 25, 10 жана 1 ppb каалаган концентрацияга жетүү үчүн аралык эриткичти бир нече жолу суюлтуу аркылуу стандарттык ийри сызыкты даярдоо үчүн ортодогу BDDE стандарттуу эриткичти (110 ppb) колдонуңуз.1-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, BDDE стандарттык ийри сызыгы 1,1ден 110 ppbге чейин жакшы сызыктуу (R2>0,99) бар экени аныкталган.Стандарттык ийри төрт көз карандысыз экспериментте кайталанган.
Сүрөт 1 BDDE стандарттык калибрлөө ийри сызыгы LC-MS анализи аркылуу алынган, анда жакшы корреляция байкалган (R2>0,99).
Кыскартуулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфири;LC-MS, суюк хроматография жана масс-спектрометрия.
Кайчылаш байланышкан HAдагы BDDE стандарттарын жана базалык чечимдеги BDDE стандарттарын аныктоо жана сандык аныктоо үчүн LC-MS анализи колдонулган.
Хроматографиялык бөлүү LUNA 2,5 μm C18(2)-HST колоннасында (50×2,0 мм2; Phenomenex, Torrance, CA, АКШ) жетишилди жана анализ учурунда бөлмө температурасында (25°C) сакталды.Көчмө фаза ацетонитрилден (эриткич А) жана 0,1% кумурска кислотасы бар суудан (эритүүчү В) турат.Мобилдик фаза градиенттүү элюция менен элюталанат.Градиент төмөнкүдөй: 0 мүнөт, 2% А;1 мүнөт, 2% А;6 мүнөт, 98% А;7 мүнөт, 98% А;7,1 мүнөт, 2% А;10 мүнөт , 2% A. Иштөө убактысы 10 мүнөт жана инъекциянын көлөмү 20 мкл.BDDE сактоо убактысы болжол менен 3,48 мүнөттү түзөт (эксперименттердин негизинде 3,43 мүнөттөн 4,14 мүнөткө чейин).Мобилдик фаза LC-MS анализи үчүн 0,25 мл/мин агымдын ылдамдыгы менен айдалды.
BDDE анализи жана MS тарабынан сандык аныктоо үчүн UPLC системасы (Суулар) электроспрей иондоштуруу булагы менен жабдылган API 3000 үч төрт полюстук масса спектрометри (AB SCIEX) менен бириктирилип, анализ оң ион режиминде (ESI+) жүргүзүлөт.
BDDE боюнча жүргүзүлгөн ион фрагменттеринин анализине ылайык, эң жогорку интенсивдүүлүккө ээ фрагмент 129,1 Дага туура келген фрагмент деп аныкталган (6-сүрөт).Демек, сандык аныктоо үчүн көп иондук мониторинг режиминде (MIM) BDDE массасынын конверсиясы (масса-зарядка катышы [м/з]) 203,3/129,1 Да түзөт.Ал ошондой эле LC-MS талдоо үчүн толук сканерлөө (FS) режимин жана продукт ион сканерлөө (PIS) режимин колдонот.
Методдун өзгөчөлүгүн текшерүү үчүн бош үлгү (баштапкы мобилдик фаза) талданган.203,3/129,1 Да массалык конверсиясы менен бош үлгүдө сигнал табылган жок.Эксперименттин кайталанышына карата 55 ppb (калибрлөө ийри сызыгынын ортосунда) 10 стандарттык инъекция анализденди, натыйжада калдык стандарттык четтөө (RSD) <5% (маалыматтар көрсөтүлгөн эмес).
Калган BDDE мазмуну төрт көз карандысыз экспериментке туура келген сегиз түрдүү автоклавдуу BDDE кайчылаш байланышкан HA гидрогелдеринде сандык бааланган.“Материалдар жана методдор” бөлүмүндө сүрөттөлгөндөй, сандык аныктоо BDDE стандарттык суюлтуусунун регрессия ийри сызыгынын орточо мааниси менен бааланат, ал BDDE массасынын өтүүсүндө 203,3/129,1 Да, кармап калуу менен аныкталган уникалдуу чокуга туура келет. убакыт 3.43 үчүн 4.14 мүнөт Күтүү эмес.2-сүрөттө 10 ppb BDDE маалымдама стандартынын хроматограммасынын үлгүсү көрсөтүлгөн.1-таблицада сегиз түрдүү гидрогелдердин калдыктарынын BDDE мазмуну жалпыланган.Маани диапазону 1ден 2,46 ppbге чейин.Ошондуктан, үлгүдөгү калдык BDDE концентрациясы адам колдонуусу үчүн алгылыктуу (<2 промилле).
Сүрөт 2 10 ppb BDDE маалымдама стандартынын ион хроматограммасы (Sigma-Aldrich Co), MS (m/z) өтүү 203.30/129.10 Da LC-MS анализи аркылуу алынган (оң MRM режиминде).
Кыскартуулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфири;LC-MS, суюк хроматография жана масс-спектрометрия;MRM, бир нече реакция мониторинги;MS, массалык;м/з, масса менен заряддын катышы.
Эскертүү: 1-8 үлгүлөрү автоклавда BDDE кайчылаш байланышкан HA гидрогелдери.Гидрогелдеги BDDEнин калдык көлөмү жана BDDE кармоо убактысынын эң жогорку чеги да билдирилди.Акыр-аягы, ар кандай сактоо убакыттары менен жаңы чокулардын бар экендиги да билдирилди.
Кыскартуулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфири;HA, гиалурон кислотасы;MRM, бир нече реакция мониторинги;tR, кармоо убактысы;LC-MS, суюк хроматография жана масс-спектрометрия;RRT, салыштырмалуу кармоо убактысы.
Таң калыштуусу, LC-MS ион хроматограммасынын анализи бардык автоклавдуу кайчылаш байланышкан HA гидрогели үлгүлөрүнүн негизинде 2,73 мүнөттөн 3,29 мүнөткө чейин кыскараак кармоо убагында кошумча чоку болгонун көрсөттү.Мисалы, 3-сүрөт кайчылаш байланышкан HA үлгүсүнүн ион хроматограммасын көрсөтөт, мында кошумча чоку болжол менен 2,71 мүнөттүн башка кармоо убактысында пайда болот.Жаңы байкалган чоку менен BDDE чокусунун ортосундагы байкалган салыштырмалуу кармап туруу убактысы (RRT) 0,79 деп табылган (1-таблица).Жаңы байкалган чоку LC-MS анализинде колдонулган C18 тилкесинде азыраак сакталып калганын билгендиктен, жаңы чоку BDDEге караганда көбүрөөк полярдуу кошулмага туура келиши мүмкүн.
Сүрөт 3 LC-MS тарабынан алынган кайчылаш байланышкан HA гидрогели үлгүсүнүн иондук хроматограммасы (MRM массасынын конверсиясы 203,3/129,0 Да).
Аббревиатуралар: HA, гиалурон кислотасы;LC-MS, суюк хроматография жана масс-спектрометрия;MRM, бир нече реакция мониторинги;RRT, салыштырмалуу кармоо убактысы;tR, кармоо убактысы.
байкалган жаңы чокулары колдонулган чийки заттардын башында булгоочу болушу мүмкүн экенин жокко чыгаруу үчүн, бул чийки заттар да ошол эле LC-MS талдоо ыкмасын колдонуу менен талдоого алынган.Анализге алынган баштапкы материалдарга суу, суудагы 2% NaHA, суудагы 1% NaOH жана кайчылаш реакцияда колдонулган ошол эле концентрациядагы BDDE кирет.Колдонулган баштапкы материалдын ион хроматограммасында эч кандай кошулма же чоку көрсөтүлгөн эмес жана анын кармалуу убактысы байкалган жаңы чокуга туура келет.Бул факт баштапкы материал гана эмес, талдоо процедурасына тоскоол боло турган ар кандай кошулмалар же заттарды камтышы мүмкүн деген ойду жокко чыгарат, бирок башка лабораториялык продуктулар менен мүмкүн болгон кайчылаш булгануунун белгиси жок.BDDE LC-MS анализинен кийин алынган концентрациянын маанилери жана жаңы чокулары 2-таблицада (1-4 үлгүлөр) жана 4-сүрөттө ион хроматограммасында көрсөтүлгөн.
Эскертүү: 1-4 үлгүлөрү автоклавдуу BDDE кайчылаш байланышкан HA гидрогельдерин өндүрүү үчүн колдонулган чийки затка туура келет.Бул үлгүлөр автоклавда сакталган эмес.
Кыскартуулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфири;HA, гиалурон кислотасы;LC-MS, суюк хроматография жана масс-спектрометрия;MRM, бир нече реакция мониторинги.
4-сүрөт HA жана BDDE кайчылаш байланыш реакциясында колдонулган чийки заттын үлгүсүнүн LC-MS хроматограммасына туура келет.
Эскертүү: Булардын баары кайчылаш байланыш реакциясын жүргүзүү үчүн колдонулган бирдей концентрацияда жана катышта өлчөнөт.Хроматограмма менен талданган чийки заттын сандары төмөнкүлөргө туура келет: (1) суу, (2) 2% ГА суу эритмеси, (3) 1% NaOH суу эритмеси.LC-MS анализи 203,30/129,10 Да (оң MRM режиминде) массалык конвертациялоо үчүн жүргүзүлөт.
Кыскартуулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфири;HA, гиалурон кислотасы;LC-MS, суюк хроматография жана масс-спектрометрия;MRM, бир нече реакция мониторинги.
Жаңы чокулардын пайда болушуна шарт түзгөн шарттар изилденген.Кайчылаш байланышкан HA гидрогелин өндүрүү үчүн колдонулган реакция шарттары BDDE кайчылаш агентинин реактивдүүлүгүнө кандай таасир этээрин изилдөө максатында, жаңы чокулардын пайда болушуна алып келүүчү (мүмкүн кошумча продуктулар) ар кандай өлчөөлөр жүргүзүлгөн.Бул аныктоолордо, биз суулуу чөйрөдө NaOH ар кандай концентрациялары (0%, 1%, 0,1% жана 0,01%) менен иштетилген, андан кийин автоклавда же жок болгон акыркы BDDE кайчылаш байланыштыргычын изилдеп, талдап чыктык.Ошол эле шарттарды окшоштуруунун бактерия процедурасы кайчылаш байланышкан HA гидрогелин өндүрүү үчүн колдонулган ыкма менен бирдей."Материалдар жана методдор" бөлүмүндө сүрөттөлгөндөй, үлгүнүн массалык өтүшү LC-MS тарабынан 203.30 / 129.10 Да чейин талданды.BDDE жана жаңы чокунун концентрациясы эсептелген жана натыйжалар 3-таблицада көрсөтүлгөн. Эритмеде NaOH бар болгонуна карабастан, автоклавдаланбаган үлгүлөрдө жаңы чокулар табылган жок (үлгүлөр 1-4, таблица). 3).Автоклавдалган үлгүлөр үчүн жаңы чокулар эритмеде NaOH болгондо гана аныкталат жана чокунун пайда болушу эритмедеги NaOH концентрациясынан көз каранды көрүнөт (5-8 үлгүлөр, 3-таблица) (RRT = 0,79).5-сүрөттө НАОН бар же жок болгон эки автоклав үлгүсүн көрсөткөн ион хроматограммасынын мисалы көрсөтүлгөн.
Кыскартуулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфири;LC-MS, суюк хроматография жана масс-спектрометрия;MRM, бир нече реакция мониторинги.
Эскертүү: Жогорку хроматограмма: Үлгү 0,1% NaOH суулуу эритмеси менен иштетилип, автоклавдалат (120°C 20 мүнөт).Төмөнкү хроматограмма: Үлгү NaOH менен иштетилген эмес, бирок ошол эле шарттарда автоклавда сакталган.203.30 / 129.10 Da (оң MRM режиминде) массалык кайра LC-MS тарабынан талдоого алынган.
Кыскартуулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфири;LC-MS, суюк хроматография жана масс-спектрометрия;MRM, бир нече реакция мониторинги.
NaOH бар же жок бардык автоклавдалган үлгүлөрүндө BDDE концентрациясы абдан төмөндөгөн (16,6 эсеге чейин) (5-8 үлгүлөр, 2-таблица).BDDE концентрациясынын төмөндөшү жогорку температурада суу 1,2-диолдук кошулманы пайда кылуу үчүн BDDEнин эпоксиддик шакекчесин ачуу үчүн негиз (нуклеофил) ролун аткара алгандыгына байланыштуу болушу мүмкүн.Бул кошулманын моноизотоптук сапаты BDDE сапатынан айырмаланып турат, ошондуктан ага таасир этпейт.LC-MS 203.30/129.10 Да массалык жылышты аныктады.
Акырында, бул эксперименттер жаңы чокулардын генерациясы BDDE, NAOH жана автоклав процессинин болушуна көз каранды экенин, бирок HA менен эч кандай байланышы жок экенин көрсөтүп турат.
Болжол менен 2.71 мүнөт кармап калуу убагында табылган жаңы чокусу LC-MS менен мүнөздөлгөн.Бул максатта BDDE (9,9 мг/мл) 1% NaOH суулуу эритмесинде инкубацияланган жана автоклавда сакталган.4-таблицада жаңы чокунун мүнөздөмөлөрү белгилүү BDDE эталондук чокусу менен салыштырылган (сактоо убактысы болжол менен 3,47 мүнөт).Эки чокудагы иондун фрагментациясынын анализинин негизинде 2,72 мүнөт кармап туруу убактысы менен чоку BDDE чокусу сыяктуу эле фрагменттерди көрсөтөт, бирок интенсивдүүлүгү ар кандай (6-сүрөт) деген жыйынтыкка келүүгө болот.2,72 мүнөт кармоо убактысына (PIS) туура келген чоку үчүн 147 Да массасында фрагментациядан кийин бир кыйла интенсивдүү чоку байкалган.Бул аныктоодо колдонулган BDDE концентрациясында (9,9 мг/мл) хроматографиялык бөлүүдөн кийин ультра кызгылт көк спектрде ар кандай жутуу режимдери (UV, λ=200 нм) да байкалган (7-сүрөт).2,71 мүнөт кармоо убактысы менен чокусу дагы эле 200 нмде көрүнүп турат, ал эми BDDE чокусун хроматограммада ошол эле шарттарда байкоого болбойт.
4-таблица. Болжол менен 2,71 мүнөт кармап туруу убактысы менен жаңы чокуга жана 3,47 мүнөткө созулган BDDE чокусуна мүнөздөмөлөрдүн натыйжалары
Эскертүү: Бул жыйынтыктарды алуу үчүн, LC-MS жана HPLC анализдери (MRM жана PIS) эки чокуда аткарылган.HPLC анализи үчүн 200 нм толкун узундугу менен UV аныктоо колдонулат.
Кыскартуулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфири;HPLC, жогорку натыйжалуу суюк хроматография;LC-MS, суюк хроматография жана масс-спектрометрия;MRM, бир нече реакция мониторинги;м/з, масса менен заряддын катышы;PIS, продукт ион сканерлөө;ультрафиолет нуру, ультрафиолет нуру.
Эскертүү: массалык фрагменттери LC-MS талдоо (PIS) менен алынган.Жогорку хроматограмма: BDDE стандарттык үлгү фрагменттеринин массалык спектри.Төмөнкү хроматограмма: Жаңы чокунун массалык спектри аныкталды (BDDE чокусу менен байланышкан RRT 0,79).BDDE 1% NaOH эритмесинде иштетилген жана автоклавда сакталган.
Кыскартуулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфир;LC-MS, суюк хроматография жана масс-спектрометрия;MRM, бир нече реакция мониторинги;PIS, продукт ион сканерлөө;RRT, салыштырмалуу кармоо убактысы.
7-сүрөт 203,30 Да прекурсор ионунун иондук хроматограммасы жана (A) 2,71 мүнөт кармоо убактысы менен жаңы чоку жана (B) BDDE эталондук стандарттуу чокусун 3,46 мүнөттө 200 нмде UV аныктоо.
Өндүрүлгөн бардык кайчылаш байланышкан HA гидрогелдеринде LC-MS сандык аныктоодон кийин BDDE калдыктарынын концентрациясы <2 промилледе болгондугу байкалды, бирок анализде жаңы белгисиз чоку пайда болду.Бул жаңы чоку BDDE стандарттык продуктуга дал келбейт.BDDE стандарттык продуктусу да оң MRM режиминде ошол эле сапаттын конверсиясынан (MRM конверсиясы 203,30/129,10 Да) анализден өттү.Жалпысынан алганда, хроматография сыяктуу башка аналитикалык ыкмалар гидрогелдерде BDDE аныктоо үчүн чек сыноолор катары колдонулат, бирок максималдуу аныктоо чеги (LOD) 2 промилледен бир аз төмөн.Башка жагынан алганда, буга чейин, NMR жана MS кайчылаш-байланыштуу жана / же кайчылаш-байланыштуу HA азыктарынын кант бирдигинин фрагменттерин HA өзгөртүү даражасын мүнөздөш үчүн колдонулган.Бул ыкмалардын максаты биз бул макалада сүрөттөлгөн төмөнкү концентрацияларда BDDE калдыктарын аныктоону сандык эсепке алуу эч качан болгон эмес (биздин LC-MS методубуздун LOD = 10 ppb).
Посттун убактысы: 01-01-2021